體外診斷試劑的主要類型和技術(shù)原理？

光譜分析技術(shù) 

該技術(shù)是基于物質(zhì)與輻射能作用時，測量由物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生量子化的能級間躍遷而產(chǎn)生的發(fā)射、吸收或散射輻射所具有的波長和強度，從而進行分析的方法。按作用對象的不同，光譜分析技術(shù)可分為原子光譜法（測量離子、微量元素等）和分光光度法；按獲得方式的不同，該技術(shù)可分為吸光光度法和發(fā)射光譜法。

吸光光度法是根據(jù)溶液中物質(zhì)對光選擇性吸收的特性進行分析的方法。有色溶液對光線有選擇性吸收的特性，不同物質(zhì)由于其分子結(jié)構(gòu)不同，對不同波長光的吸收能力不同，每種物質(zhì)都有特定的吸收光譜。當(dāng)一定波長的光通過該物質(zhì)的溶液時，根據(jù)物質(zhì)對光的吸收程度（吸光度）求出該物質(zhì)含量的方法稱為吸光光度法。

吸光光度法可分為比色法和分光光度法兩大類。比色法又可分為目視比色法和光電比色法。分光光度法與光電比色法的原理類似，都是通過光電池或光電管測量溶液透光度的強度，來進行分析的方法。

當(dāng)利用比色法測定溶液中的某種化學(xué)成分時，通常需加入顯色劑，使其產(chǎn)生有色化合物，顏色的深淺與待測化學(xué)成分的含量成正比，可據(jù)此測定待測物的濃度。

發(fā)射光譜法是通過測量物質(zhì)的發(fā)射光譜的波長和強度，來進行定性和定量分析的方法。

許多物質(zhì)是光致發(fā)光的，即它們可吸收電磁輻射，然后重新發(fā)射出相同或更長波長的輻射。光致發(fā)光最常見的類型是熒光和磷光。利用熒光強度進行分析的方法稱為熒光法。在熒光分析中，待測物質(zhì)分子成為激發(fā)態(tài)時所吸收的光稱為激發(fā)光，處于激發(fā)態(tài)的分子回到基態(tài)時所產(chǎn)生的熒光稱發(fā)射光。熒光法測定的是待測物質(zhì)分子受光激發(fā)后所發(fā)射的熒光的強弱，而不是測激發(fā)光的強弱。凡能產(chǎn)生熒光的化合物均可采用熒光分析法來進行定性或定量測量。

散射光譜技術(shù)是測定光線通過溶液混懸顆粒后的光吸收或光散射程度的一類定量測量方法，主要用于免疫檢測系統(tǒng)中，常稱免疫濁度法。

電化學(xué)分析法 

利用物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)測定化學(xué)電池的電位、電流或電量變化來進行分析的方法稱電化學(xué)分析法。電化學(xué)分析法有多種，測定原電池電動勢以求物質(zhì)含量的分析方法稱為電位法或電位分析法；通過對電阻的測定以求物質(zhì)含量的分析法稱為電導(dǎo)法；借助某些物理量的突變作為滴定分析終點的指示，稱為電容量分析法。目前在臨床中應(yīng)用的電化學(xué)分析法主要是離子選擇電位分析法，該方法利用電極電位及溶液內(nèi)活性物質(zhì)兩者間的關(guān)系來進行分析。

從方法學(xué)角度，可將臨床免疫診斷試劑分為免疫比濁法（在散射光譜技術(shù)中已介紹）、酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光等不同類型。

酶聯(lián)免疫法 

該技術(shù)是將酶高效催化反應(yīng)的專一性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合的一種免疫標(biāo)記檢測技術(shù)。其原理是，將酶與抗體或抗原結(jié)合成酶標(biāo)記結(jié)合物，酶標(biāo)記結(jié)合物既保留了抗原或抗體的免疫學(xué)活性，又保留了酶對底物的催化活性，在酶標(biāo)記抗體與抗原的特異性反應(yīng)完成后，加入酶作用的相應(yīng)底物，通過酶催化底物完成顯色反應(yīng)，對抗原或抗體進行定位、定性和定量測定。

免疫熒光技術(shù) 該技術(shù)是利用物質(zhì)吸收光能后產(chǎn)生激發(fā)態(tài)而發(fā)光的特性，將具有這種特性的熒光素用化學(xué)方法結(jié)合在特異的抗體或抗原上，又不損害其抗體或抗原活性的一種熒光顯微鏡下的示蹤技術(shù)。

流式細胞術(shù) 

該技術(shù)是對單細胞或其他生物粒子膜表面及內(nèi)部的成分進行定量分析和分選的檢測手段，它可高速分析上萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數(shù)。同傳統(tǒng)的熒光鏡檢查相比，該方法具有速度快、準(zhǔn)確度高等特點。

膠體金技術(shù) 

該技術(shù)可按照液體的流動形式分為膠體金免疫滲濾試驗和膠體金免疫層析試驗。

化學(xué)發(fā)光免疫分析 

該技術(shù)是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術(shù)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析包含免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)兩部分。

臨床分子生物學(xué)診斷試劑即通常所說的基因診斷試劑，其采用的技術(shù)原理主要包括核酸分子雜交技術(shù)、DNA測序技術(shù)、基因芯片技術(shù)等。

核酸分子雜交技術(shù) 該技術(shù)也稱基因探針技術(shù)，是利用核酸的變性、復(fù)性和堿基互補配對的原理，用已知的探針序列檢測樣本中是否含有與之配對的核苷酸序列的技術(shù)。該技術(shù)是臨床應(yīng)用最早、最基礎(chǔ)的分子生物學(xué)技術(shù)，是印跡雜交、基因芯片等技術(shù)的基礎(chǔ)。

DNA序列分析 

該分析技術(shù)是分子生物學(xué)重要的基本技術(shù)。以某測序儀為例，其采用4種熒光染料分別標(biāo)記終止物或引物，經(jīng)Sanger測序反應(yīng)后，反應(yīng)產(chǎn)物帶有不同的熒光標(biāo)記。一個樣品的4個測序反應(yīng)產(chǎn)物可在同一泳道內(nèi)電泳，從而降低測序泳道間遷移率差異對精確性的影響。通過電泳將各個熒光標(biāo)記片段分開，同時，激光檢測器同步掃描，激發(fā)的熒光經(jīng)光柵分光，以區(qū)分代表不同堿基信息的不同顏色熒光，并在CCD攝影機上同步成像。電腦可在電泳過程中對儀器運行情況進行同步檢測，結(jié)果能以電泳圖譜、熒光吸收峰圖或堿基排列順序等方式輸出。此方法測序為一代測序的基本原理。

高通量測序技術(shù)是對傳統(tǒng)測序的革命性改變，可一次性對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定。第二代測序技術(shù)將片段化的基因組DNA兩側(cè)連上接頭，隨后用不同的方法產(chǎn)生幾百萬個空間固定的PCR克隆陣列。目前該技術(shù)已發(fā)展到第三代測序技術(shù)，即單分子測序技術(shù)。